V8蛋白酶
Cat.No.：66676-43-5
EC：3.4.21.19
全名: 序列分析純V8蛋白酶；金黃色葡萄球菌V8蛋白酶
別名: V8蛋白酶；谷氨酰胺內(nèi)切酶；天冬酰胺內(nèi)切酶
儲存條件：凍干粉，2-8℃
來源：基因工程生產(chǎn)，大腸桿菌表達(dá)。
1.產(chǎn)品簡介
V8蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶家族，能特異水解谷氨酸或天冬氨酸殘基羧基側(cè)肽鍵。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4緩沖液中識別并切割Glu羧基端肽鍵，在pH 7.8的磷酸鹽緩沖液中識別并切割Glu或Asp羧基端肽鍵，且對Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之間均有活性，最適pH為8.0-8.5。在進(jìn)行蛋白質(zhì)酶切測序、肽圖譜分析和肽質(zhì)量指紋圖譜分析中使用時，可以單獨(dú)使用或與其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制劑有二異丙基氟磷酸（DFP）、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺?；?L-賴氨酸氯甲基酮（TLCK）。
2.產(chǎn)品特性
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來源 |
重組大腸桿菌 |
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產(chǎn)品外觀 |
白色、類白色、類黃色粉末 |
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比活 |
≥ 5.0 AU /mg pro. |
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蛋白電泳 |
單一主條帶 |
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分子量 |
24.0±2.4 kDa |
單位定義：在25℃，pH7.8的條件下，每分鐘催化底物（Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide）生成1μmol對硝基苯胺（4-nitroaniline）所需要的酶量為一個酶活性單位。
比活性：25°C時，以Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide為底物測得的活性約為20 U/mg pro.（對應(yīng)于37°C時，以酪蛋白為底物的活性約為500 U/mg pro）。
3.儲存和運(yùn)輸穩(wěn)定性
儲存穩(wěn)定性：重組V8蛋白酶凍干粉存于2-8℃，24個月穩(wěn)定；
溶解后穩(wěn)定性：用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下（1mg/ml），6個月穩(wěn)定；
用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃（1mg/ml，無菌），2個月穩(wěn)定；
用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃（0.5mg/ml）12h，活性可維持85%以上；
溶解后溶液可反復(fù)凍融10次無活性損失。
運(yùn)輸穩(wěn)定性：藍(lán)冰保溫運(yùn)輸，活性穩(wěn)定。
4.推薦使用方法
1）使用前注意
可按使用量分裝以限度避免污染或自切。
2）目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8，若溶解度不好對目的蛋白變性，添加尿素、SDS、DTT或加熱。尿素和SDS對V8蛋白酶的影響見表一。
3）酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推薦比例為1/20-1/100（W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。
表一：V8蛋白酶在含有不同濃度變性劑，尿素25℃2h，SDS25℃12h的穩(wěn)定性
（注：V8蛋白酶0.5mg/ml，50mM Tris-HCl pH8.0）
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變性劑 |
濃度 |
殘余酶活 |
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不添加 |
0 |
100% |
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尿素 |
2M |
95% |
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5M |
12% |
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8M |
0 |
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SDS |
0.1% |
90% |
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0.5% |
80% |
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1% |
50% |
100 μl胰島素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超純水補(bǔ)至400 μl。37 ℃水浴反應(yīng)2 h，加6 μl磷酸溶液終止反應(yīng)，C18柱分析：
A：酶切之前 B：酶切之后
5.產(chǎn)品優(yōu)勢
6.相關(guān)產(chǎn)品
重組腸激酶；
序列分析純羧肽酶B；
序列分析純胰蛋白酶；
序列分析純糜蛋白酶。
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