近日，一項(xiàng)來自加利福尼亞生物醫(yī)學(xué)研究所（Calibr）Scripps Research的最新CAR-T科研進(jìn)展，發(fā)表在今年11月版的《美利堅(jiān)合眾國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》（PNAS）上。
2017年，Kymriah和Yescarta取得了巨大成功，該研究領(lǐng)域開始蓬勃發(fā)展，CAR-T細(xì)胞療法大有前途，對(duì)于很多經(jīng)先前治療失敗的患者，它已做出了令人驚喜的反應(yīng)。但伴隨著這種成功，以細(xì)胞因子風(fēng)暴為代表性的副作用也浮出水面。所以，科學(xué)家們正試圖建立一種更安全，更有效的CAR-T藥物，利用患者自身的免疫系統(tǒng)來對(duì)抗癌癥。
論文中所提到的“可切換控制”的CAR-T療法平臺(tái)技術(shù)，或許是一種更具有希望的、能夠降低風(fēng)險(xiǎn)的、并且更加有效的癌癥治療形式。Calibr的CAR-Ts版本以更自然的方式工作，可能會(huì)預(yù)防細(xì)胞因子風(fēng)暴和其他免疫相關(guān)的并發(fā)癥。
“可切換控制”的CAR-T療法平臺(tái)技術(shù)可以 “調(diào)整”T細(xì)胞的活動(dòng)，模仿T細(xì)胞的自然行為，通過使用基于抗體的開關(guān)對(duì)CAR -T細(xì)胞活性進(jìn)行劑量滴定控制，以周期性方式選擇打開和關(guān)閉，指導(dǎo)CAR-T細(xì)胞群進(jìn)行適宜的擴(kuò)張和收縮。在這里可以利用可切換平臺(tái)的功能可逆性來通過開關(guān)的循環(huán)劑量來結(jié)合“休息”階段，以便能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)強(qiáng)大的中央記憶群體。
現(xiàn)在，Calibr的研究結(jié)果指向更安全有效，在同源小鼠模型中也證明可切換平臺(tái)可以賦予抗腫瘤功效，同時(shí)解除長(zhǎng)期持續(xù)存在的慢性B細(xì)胞再生障礙等問題。但研究還處于早期階段，預(yù)計(jì)將于2019年首次在人體中進(jìn)行試驗(yàn)。
人源化小鼠CD19可切換CAR T平臺(tái)的描述和CD19開關(guān)的體外活性
將PNE移植到人源化小鼠CD19（1D3）開關(guān)的輕鏈（LC）或重鏈（HC）的N末端（N Term）或C末端（C Term）。建立了四個(gè)單價(jià)開關(guān)（LCNT，LCCT，HCNT和HCCT）和兩個(gè)二價(jià)開關(guān)（NTBV和CTBV），和無肽對(duì)照的WT開關(guān)。隨后所有的體內(nèi)研究均在人源化小鼠CD19 LCNT開關(guān)內(nèi)進(jìn)行。VL，VH，CL和CH分別表示所描繪的Fab的可變輕鏈，可變重鏈，恒定輕鏈和恒定重鏈。
體外評(píng)估sCAR設(shè)計(jì)
第二代sCAR構(gòu)建體含有鼠CD28或鼠4-1BB作為共刺激分子，第三代構(gòu)建體也包含兩者。基于鼠CD28的鉸鏈被IgG4m鉸鏈或基于鼠CD8的鉸鏈替換。
圖表描繪了一式三份進(jìn)行的兩個(gè)合并實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。通過用Dunn的非參數(shù)多重比較檢驗(yàn)完成的Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。顯示了平均值和SEM（* P <0.05，** P <0.01，和*** P <0.001; ns，不顯著）。
在同系小鼠腫瘤模型中sCAR設(shè)計(jì)的體內(nèi)功效和持久性
在第0天將C3H小鼠植入38c13細(xì)胞，并在D7用CTX預(yù)處理。第二天（D8），靜脈注射sCAR / CAR T細(xì)胞靜脈注射抗鼠CD19開關(guān)劑量（或PBS溶液）在D8，D36和D63 / 64開始，每隔一天以1 mg進(jìn)行8次劑量（灰色陰影）在2周開/關(guān)（休息）循環(huán)中/ kg。（B - E）該研究通過評(píng)估鼠CD28與鼠4-1BB共刺激分子的比較來比較Ig-28z，Ig-BBz和Ig-28BBz的功效。（F - I）在本研究中，比較Ig-28BBz（1-3），Ig-28BBz和8-28BBz以評(píng)估IgG4m與基于CD8的鉸鏈和CD3ζ（WT）對(duì)CD3ζ（1-3） 。1D3 28z（1-3）用作對(duì)照（n = 5-6）。結(jié)合這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示在SI附錄，圖S3中顯示均值和SD。Mann-Whitney檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明在95％CI時(shí)有顯著差異（** P <0.01）。
轉(zhuǎn)換給藥方案對(duì)sCAR T細(xì)胞擴(kuò)增和表型的影響
用CTX預(yù)處理C3H小鼠，并在第二天用Ig-28BBz sCAR T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移。在第（D）0天和在D28，每隔一天，在三種給藥方案中的一種中，在細(xì)胞輸注后開始抗鼠CD19開關(guān)劑量：1周/ 2kg的2周（8個(gè)劑量）（圖3和4中使用的參考條件）。 3和5），3周（12劑），0.2和5mg / kg（低/高），和1周（4劑），0.2和5mg / kg（低/高;灰色陰影/箭頭）。收集外周血并在D7，D25，D35，D53和D74（n = 5）分析B和sCAR T細(xì)胞。圖片顯示了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)的代表性實(shí)驗(yàn)。顯示均值和SD。
sCAR T細(xì)胞在組織中的運(yùn)輸
在用Ig-28BBz sCAR T細(xì)胞過繼細(xì)胞轉(zhuǎn)移之前，用CTX處理38c13荷瘤C3H小鼠。描述了一項(xiàng)研究的結(jié)果。Mann-Whitney檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)分析表明在95％CI時(shí)存在顯著差異。數(shù)據(jù)顯示為SD的平均值（** P.<0.01和*** P <0.001; ns）。
在這項(xiàng)研究展示了可切換的，持久的sCAR-T細(xì)胞群的設(shè)計(jì)和植入。單獨(dú)的鼠4-1BB共刺激結(jié)構(gòu)域，或與作為第三代構(gòu)建體的鼠CD28共刺激結(jié)構(gòu)域一起，在模型中實(shí)現(xiàn)腫瘤負(fù)荷和sCAR T細(xì)胞持續(xù)性的控制是必不可少的。在體內(nèi)，基于4-1BB的構(gòu)建體的sCAR T細(xì)胞擴(kuò)增主要是sCAR + CD8 +，這與報(bào)道的4-1BB驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞**T細(xì)胞擴(kuò)增一致。擴(kuò)增嚴(yán)格依賴于sCAR構(gòu)建體中的功能完整的CD3ζ信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。
利用Ig-28BBz sCAR T細(xì)胞的持久性和正常B細(xì)胞上CD19的表達(dá)作為靶點(diǎn)，并讀出sCAR T細(xì)胞的功效，以開發(fā)“自我接種/加強(qiáng)”方法誘導(dǎo)sCAR T細(xì)胞記憶。出于安全和B細(xì)胞再增殖的目的，控制sCAR T細(xì)胞群的其他方法包括使用殺傷開關(guān)。sCAR T細(xì)胞平臺(tái)允許保留細(xì)胞，可以通過給藥過程用于促進(jìn)sCAR T細(xì)胞中的有利特征。此外，sCAR T細(xì)胞采用通用設(shè)計(jì)，可以定向至任何治療性抗原靶標(biāo)。這在對(duì)抗由常規(guī)CAR T細(xì)胞療法觀察到的抗原丟失引起的腫瘤復(fù)發(fā)中是極其重要的。
我們期望這一“可切換控制”的CAR-T療法平臺(tái)技術(shù)，能夠早日實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化，能夠以更具有希望、能夠降低風(fēng)險(xiǎn)、并且更加有效的癌癥治療形式來造福癌癥患者.
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