說(shuō)到治療癌癥的細(xì)胞療法，我們首先想到的可能是CAR-T細(xì)胞療法和TCR細(xì)胞療法。兩款CAR-T細(xì)胞療法已經(jīng)獲得FDA批準(zhǔn)上市，它們?cè)谥委煱籽》矫嬉呀?jīng)取得了出色的療效。然而，在治療實(shí)體瘤方面，CAR-T和TCR細(xì)胞療法取得的進(jìn)展卻非常有限。在今年的ASCO年會(huì)上，一種已經(jīng)有30年歷史的細(xì)胞療法卻異軍突起，在治療黑色素瘤和宮頸癌患者的臨床試驗(yàn)上獲得了出色的結(jié)果。這就是Iovance Biotherapeutics公司的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）療法。隨著這一突破性進(jìn)展的出現(xiàn)，對(duì)TIL療法的關(guān)注也與日俱增。今天藥明康德內(nèi)容團(tuán)隊(duì)將與讀者介紹TIL療法的前世、今生和未來(lái)。

       腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，在“前線”與癌細(xì)胞作戰(zhàn)的“士兵”

       腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）是離開(kāi)血液循環(huán)，遷移到腫瘤附近的淋巴細(xì)胞，它們包括T細(xì)胞，B細(xì)胞。如果把人體免疫系統(tǒng)對(duì)癌癥的反應(yīng)比作一場(chǎng)戰(zhàn)爭(zhēng)，TIL是從身體各處奔往前線，與癌細(xì)胞作戰(zhàn)的“戰(zhàn)士”。它們可以起到殺傷癌細(xì)胞的作用。腫瘤中TIL的多少是預(yù)測(cè)癌癥患者預(yù)后和對(duì)免疫療法反應(yīng)的重要指標(biāo)。

       然而，雖然TIL出現(xiàn)在腫瘤的微環(huán)境中，卻不意味著癌細(xì)胞就可以被消滅。很多時(shí)候，在腫瘤中出現(xiàn)的TIL太少，并且被腫瘤微環(huán)境中的多種因素抑制了殺傷癌細(xì)胞的能力。沿用戰(zhàn)爭(zhēng)的比喻，這些到達(dá)前線的戰(zhàn)士，有的被敵人“招安”（受到PD-L1或免疫抑制細(xì)胞的抑制），還有的已經(jīng)戰(zhàn)斗了太久，遍體鱗傷沒(méi)有什么戰(zhàn)斗力（T細(xì)胞耗竭）。

       歷史“悠久”的TIL療法

       既然這些“戰(zhàn)士”具有和癌細(xì)胞作戰(zhàn)的能力，那么我們能不能想個(gè)辦法讓它們重新煥發(fā)青春，提高它們的數(shù)目，增強(qiáng)它們的戰(zhàn)斗力呢？這是美國(guó)國(guó)家癌癥研究所（NCI）的Steven Rosenberg博士和他的同事們想要解決的問(wèn)題。說(shuō)到TIL療法，就需要提到Steven Rosenberg博士，早在1988年，他作為第一作者，就在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》上發(fā)表研究，表明使用從轉(zhuǎn)移性黑色素瘤組織中分離，在體外通過(guò)IL-2刺激培養(yǎng)并增殖的TIL，在注回患者體內(nèi)后能夠?yàn)?0%的患者帶來(lái)緩解。

       Rosenberg博士是TIL療法的先驅(qū)。他和同事的研究開(kāi)創(chuàng)了使用IL-2刺激TIL，促進(jìn)TIL細(xì)胞增殖的培養(yǎng)方法。時(shí)至今日，Rosenberg博士領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)還在進(jìn)行TIL療法的臨床試驗(yàn)，力圖擴(kuò)展TIL療法的應(yīng)用范圍。

       雖然與CAR-T和TCR療法相比，TIL療法的歷史“悠久”，然而歷史上，它的應(yīng)用一直面臨著兩大難題：1，將從患者的腫瘤組織中分離的TIL進(jìn)行擴(kuò)增和激活是一個(gè)費(fèi)時(shí)費(fèi)力的大工程。2，TIL療法對(duì)黑色素瘤雖然效果顯著，但是在治療其它類型癌癥時(shí)的效果卻不明顯。近年來(lái)，在研發(fā)人員的不斷努力下，這兩重障礙正在被突破。

       TIL療法的制造過(guò)程和它的優(yōu)勢(shì)

       TIL療法與CAR-T和TCR細(xì)胞療法的區(qū)別在于，T細(xì)胞不需要經(jīng)過(guò)基因工程的改造。TIL療法的基本步驟是：研究人員從患者體內(nèi)取出新鮮腫瘤組織，在體外將它們打散，在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境下通過(guò)使用生長(zhǎng)因子（通常為IL-2和CD3受體激動(dòng)劑）來(lái)刺激T細(xì)胞的增殖。T細(xì)胞的擴(kuò)增過(guò)程通常需要5-6周的時(shí)間，可以將T細(xì)胞的數(shù)目增加到500億個(gè)。

       在將TIL輸回患者體內(nèi)之前，患者通常需要接受清除淋巴細(xì)胞的化療（lymphodepleting chemotherapy）。這一步驟可以削弱身體中已有的淋巴細(xì)胞對(duì)促進(jìn)T細(xì)胞生長(zhǎng)的生長(zhǎng)因子的競(jìng)爭(zhēng)，并且清除其它抑制T細(xì)胞功能的細(xì)胞，比如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和髓源性抑制細(xì)胞（MDSc）。它可以幫助輸回體內(nèi)的TIL細(xì)胞在體內(nèi)定植和發(fā)揮功能。輸回患者體內(nèi)的TIL細(xì)胞可以存活很長(zhǎng)時(shí)間，MD安德森癌癥中心（MD Anderson Cancer Center）的研究表明，在輸回患者體內(nèi)5年之后，仍然有大量TIL存留在患者體內(nèi)。多年來(lái)的研究已經(jīng)大幅度提高了從腫瘤組織中收集和擴(kuò)增TIL的技術(shù)。目前NCI和Iovance公司匯報(bào)他們能夠在超過(guò)90%攜帶大腫瘤（bulky tumor）的患者中成功收集TILs。

       與CAR-T和TCR細(xì)胞療法相比，TIL療法存在著一系列優(yōu)勢(shì)。首先，TIL療法由靶向癌細(xì)胞中多種抗原的T細(xì)胞組成，因此可以通過(guò)多個(gè)靶點(diǎn)激發(fā)對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞**反應(yīng)。而CAR-T和TCR細(xì)胞療法通常只能靶向一個(gè)抗原，這讓癌細(xì)胞可能更容易對(duì)它們產(chǎn)生抗性。目前，TCR和CAR-T療法在治療實(shí)體瘤方面進(jìn)展有限，而TIL療法已經(jīng)在多種癌癥類型中產(chǎn)生了可喜的療效。由于TIL療法使用的細(xì)胞是遷移到腫瘤中的天然TIL細(xì)胞，研究人員目前還未觀察到它們的脫靶效應(yīng)和激發(fā)細(xì)胞因子釋放綜合征的能力。它可能避免困擾TCR和CAR-T細(xì)胞療法的毒副作用。

       在研TIL療法

       目前，多家學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)和生物技術(shù)公司在開(kāi)發(fā)TIL療法。其中包括Iovance公司，由MD安德森癌癥中心和Berkeley Lights聯(lián)合創(chuàng)建的Optera Therapeutics公司，TILT Biotherapeutics公司等等。Iovance公司的TIL療法的臨床進(jìn)度最快，在今年ASCO年會(huì)上，該公司開(kāi)發(fā)的lifileucil（LN-144）和LN-145分別在治療黑色素瘤和宮頸癌患者的臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出優(yōu)異的療效。Lifileucil在接受過(guò)多種療法治療的轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中，達(dá)到38%的客觀緩解率和80%的疾病控制率。這些患者中很多已經(jīng)接受過(guò)PD-1抑制劑治療。該公司開(kāi)發(fā)的LN-145療法獲得了FDA授予的突破性療法認(rèn)定，在治療宮頸癌患者時(shí)達(dá)到44%的緩解率和11%的完全緩解率。該公司計(jì)劃在2020年遞交lifileucil和LN-145的生物制劑許可申請(qǐng)（BLA）。

       而NCI的Stephanie L Goff博士在今年的ASCO年會(huì)上也匯報(bào)了NCI進(jìn)行的TIL臨床試驗(yàn)的結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果表明，從轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中獲取的TIL，能夠達(dá)到23.7%的完全緩解率。而且其中很多患者已經(jīng)無(wú)癌超過(guò)5年時(shí)間。

       “TIL療法有能力消滅最后一個(gè)癌細(xì)胞，“她說(shuō)。

       她和Rosenberg的研究團(tuán)隊(duì)在使用TIL治療其它類型癌癥方面也取得了突破，在ASCO年會(huì)上，她匯報(bào)了一名乳腺癌患者，在接受TIL治療后達(dá)到完全緩解的例子。

       TIL療法的局限和未來(lái)

       雖然TIL療法在近年來(lái)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，然而，生成足夠的TIL細(xì)胞仍然是研發(fā)人員需要面對(duì)的挑戰(zhàn)。“（基于我現(xiàn)在的理解）TIL療法要產(chǎn)生療效，需要生成比CAR-T療法多100倍的細(xì)胞，大概需要300-500億個(gè)細(xì)胞，“Goff博士表示：”冰凍冷藏這么多細(xì)胞，然后在解凍過(guò)程中維持它們的活性是一個(gè)重大挑戰(zhàn)。“ 而且，生成這么多細(xì)胞需要時(shí)間，對(duì)于病重的患者來(lái)說(shuō)，他們可能無(wú)法等那么久。Iovance公司的生產(chǎn)工藝目前能夠在22天內(nèi)完成TIL療法的生產(chǎn)。業(yè)界人士認(rèn)為，TIL細(xì)胞的生產(chǎn)時(shí)間需要壓縮到1個(gè)月以下，才能在大部分患者中使用。

       在黑色素瘤和宮頸癌之外，TIL療法對(duì)其它癌癥類型的成功率并不高。這可能是因?yàn)橄袢橄侔⒔Y(jié)直腸癌、前列腺癌等癌癥種類的免疫原性不強(qiáng)，從患者腫瘤組織中收集的TILs中，能夠殺傷癌細(xì)胞的部分很少，因此即便擴(kuò)增了很多倍，輸入到患者體內(nèi)的TILs還是不能有效對(duì)腫瘤發(fā)其攻擊。

       Rosenberg的研究團(tuán)隊(duì)解決這一難題的方法是對(duì)TIL進(jìn)行篩選，它們通過(guò)對(duì)腫瘤進(jìn)行基因組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生新抗原的基因序列，然后將這些表達(dá)新抗原的基因序列導(dǎo)入到抗體呈現(xiàn)細(xì)胞（APC）中。然后，用這些表達(dá)患者新抗原的抗體呈現(xiàn)細(xì)胞對(duì)從患者體內(nèi)獲得的T細(xì)胞進(jìn)行篩選，將對(duì)新抗原產(chǎn)生反應(yīng)的T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增并輸回患者體內(nèi)。這一策略讓TIL療法能夠在從上皮組織中生成的癌癥類型中（epithelial cancers）達(dá)到15%的緩解率。

       然而，這一進(jìn)一步篩選的過(guò)程又延長(zhǎng)了療法生產(chǎn)的時(shí)間，目前這一新抗原TIL療法的生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)10周，對(duì)于很多癌癥患者來(lái)說(shuō)，這太慢了！

       今年一月成立的Myst Therapeutics公司是致力于解決這一問(wèn)題的生物技術(shù)公司之一。該公司的創(chuàng)始人Timothy Langer先生曾經(jīng)在Kite Pharma公司任職，開(kāi)發(fā)CAR-T療法Yescarta和靶向新抗原的TCR療法產(chǎn)品。在他看來(lái)，4-5年前，CAR-T療法的制造過(guò)程也曾經(jīng)被認(rèn)為是很難解決的挑戰(zhàn)。他說(shuō)，有了開(kāi)發(fā)CAR-T產(chǎn)品的經(jīng)驗(yàn)，他覺(jué)得縮短TIL療法的生產(chǎn)時(shí)間是一個(gè)執(zhí)行層面上的問(wèn)題。

       TIL治愈癌癥的潛力正在吸引更多的公司和研究機(jī)構(gòu)投身到這一領(lǐng)域。在NCI的臨床試驗(yàn)中達(dá)到完全緩解的46名黑色素瘤患者中，只有兩名患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)。誠(chéng)然，TIL療法在黑色素瘤以外的癌癥類型中的表現(xiàn)，將決定它的治療潛力。我們期待研發(fā)人員的不斷努力，TIL療法能夠?yàn)楦囝愋偷陌┌Y患者造福。