在藥物分析活動中為使測試結(jié)果準(zhǔn)確可靠，必須對采用的分析方法的準(zhǔn)確性、科學(xué)性和可行性進(jìn)行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是我們通常所說的要對分析方法進(jìn)行驗證。我們所使的檢驗方法理論上都應(yīng)是經(jīng)過驗證和確認(rèn)的，從法規(guī)的角度來說，你在實驗室應(yīng)用的無論是原料、輔料、中間體、成品，所有的分析方法都應(yīng)該是經(jīng)過驗證的，是一個基本要求。

       哪些情況需要驗證分析方法呢，一般包括以下幾種情況，包括剛開發(fā)的分析方法（建立新方法），修正或建立分析方法用于新的問題，分析方法變更如相確定清潔驗證過程中對活性殘留的檢測方法，這種檢測方法一般都是由產(chǎn)品的含量檢測方法來轉(zhuǎn)化的，分析方法在不同實驗室和分析人員中使用，分析方法在不同的儀器是使用，證明兩個分析方法的等效性等。

       分析方法驗證的具體指標(biāo)有那些：

       驗證的指標(biāo)有準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性范圍和內(nèi)容性。

       下文解釋一系列名詞，準(zhǔn)確度和精密度，準(zhǔn)確度是指在真實值或認(rèn)可的參考值與測量值之間的相近程度。

       精密度是指在規(guī)定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行的一系列的檢測結(jié)果的接近程度，精密度可以從重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性三個層次考察。

       在相同操作條件下較短的時間間隔的精密度稱為重復(fù)性，實驗室內(nèi)部條件改變等情況下的精密度稱為中間精密度，不同實驗室之間的精密度稱這重現(xiàn)性。

       專屬性是指在一些可能存在的組分如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等對被分析物準(zhǔn)確可靠測定的能力。像鑒別實驗、雜質(zhì)檢測和含量測定均需考察專屬性。

       檢測限是指樣品中被分析物質(zhì)能夠被檢測到的最低量，但不一定是準(zhǔn)確定量。檢測限反映方法是否具備足夠的檢測靈敏度，常用的方法有直觀法，信噪比法、標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率法。 定量限是具有合適的準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠定量測定分析組分的最低限度，定量限體現(xiàn)分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力，微量衡量藥物分析，定量測定雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時就確定方法的定量限。

       線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物質(zhì)的濃度成比例關(guān)系的能力，范圍是指達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性條件下測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

       耐用性是指參數(shù)適當(dāng)發(fā)生細(xì)小變化時測量能力保持不受影響，可用于說明正常使用時的可靠性，用于為日常檢驗提依據(jù)的分析方法。典型的變動因素有樣品提取次數(shù)和時間、被測溶液的穩(wěn)定性，液相色譜的典型變動包括流動相組成pH、色譜柱、溫度、檢測波長。

       分析方法驗證具體有哪些步驟？

       以圖片形式概括：

       新方法的驗證步驟包括開發(fā)新方法，確定驗證方案確定實驗參數(shù)及及接受標(biāo)準(zhǔn)，驗證使用的儀器人員、試劑、運行驗證實驗。根據(jù)結(jié)果調(diào)整方法或接受標(biāo)準(zhǔn)運行，完成驗證實驗，建立該方法的SOP，確定日常工作中系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，最終完成完整的驗證報告。

       方法轉(zhuǎn)移

       我們在實際的工作中牽扯的方法轉(zhuǎn)移的情況是非常多的，比如說最常見的我們方法研發(fā)的實驗室轉(zhuǎn)移到產(chǎn)品檢驗（QC）實驗室，這個也是一個方法的轉(zhuǎn)移，一個大的制藥集團從研發(fā)轉(zhuǎn)移到QC這也是一個轉(zhuǎn)移，這是不同的實驗室之間的轉(zhuǎn)移，方法接收的實驗室在使用這個方法。接收方法的實驗室就需要證明其能夠成功的在本實驗室中運行該方法，這也是方法轉(zhuǎn)移。

       還有一些轉(zhuǎn)移的情況，諸如由于生產(chǎn)線的轉(zhuǎn)移使分析方法從A生產(chǎn)地點轉(zhuǎn)移到了B生產(chǎn)地點。分析方法由MAH公司轉(zhuǎn)移到了合同加工公司。它的方法開發(fā)了以后是一定要轉(zhuǎn)讓出去的。甲公司購買了乙公司的產(chǎn)品，方法由甲公司轉(zhuǎn)移到了乙公司。包括藥品的原料、輔料等。這些都會涉及到方法的轉(zhuǎn)移。

       目前對于很多的制藥企業(yè)來說都建立了內(nèi)部轉(zhuǎn)移的指導(dǎo)文件，也就是我們的方法轉(zhuǎn)移標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程?，F(xiàn)在2020版的藥典有一個明確的指導(dǎo)原則，不用像以前一樣，要么是做的太多，要么是做的太少。

       分析方法轉(zhuǎn)移的概念包括三個要素，方法建立實驗室、方法接收的實驗室和比對性實驗。所謂的轉(zhuǎn)移就必須至少包括2 個實驗室，一個是方法建立的實驗室一個是方法接收的實驗室。方法建立的實驗室負(fù)責(zé)分析方法的建立和驗證，當(dāng)其它實驗室需要按照以經(jīng)建立好的方法進(jìn)行檢驗時，這些實驗室統(tǒng)稱為方法接收實驗室。

       方法接收實驗室需要證明其能夠成功的在本實驗室操作該方法，最常用的方法就是對比性測試。如果接收實驗室采用該方法對樣品測定的結(jié)果與方法建立實驗室測定結(jié)果符合相關(guān)的接受標(biāo)準(zhǔn)，證明方法接收實驗室能夠操作此方法，方法轉(zhuǎn)移證明是成功的。

       被測樣品的數(shù)量和方法的重要性、復(fù)雜性和接收實驗室此前是否有操作此類方法的經(jīng)驗有關(guān)，所以在方法轉(zhuǎn)移之前，要注意確保方法接收實驗室工作人員對方法中涉及的關(guān)鍵參數(shù)有詳細(xì)的了解，很重要的一點是轉(zhuǎn)移程序?qū)Σ僮麝P(guān)鍵參數(shù)的說明也要詳細(xì)。轉(zhuǎn)移程序還要明確雙方實驗室的職責(zé)，進(jìn)行一個良好的溝通，同時確定各種參數(shù)的可接收范圍。

       對比性測試中需要考慮的因素主要包括：

       1. 要提供若干批次的測試樣品（如2-5批）

       2. 被測樣品的濃度級別（1-3個濃度）

       3. 重復(fù)測定次數(shù)（4-6次）

       4. 分析時間（1-3天）

       5. 分析儀器（型號相同或者不同）

       如果我們是做新藥研發(fā)的，對于進(jìn)口藥品的注冊標(biāo)準(zhǔn)，藥監(jiān)機構(gòu)涉及方法轉(zhuǎn)移的一項重要工作就是進(jìn)口藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)核，進(jìn)口藥品的質(zhì)量復(fù)核，根據(jù)我國《藥品注冊管理辦法》的規(guī)定，當(dāng)國外藥品申請在中國上市時，需要報送3批樣品在中食藥品檢定研究院或各口岸的檢驗機構(gòu)進(jìn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)核，同時提交相應(yīng)的分析方法，方法學(xué)驗證以及3批樣品的出場檢驗結(jié)果。這個就是一個最典型的方法轉(zhuǎn)移，我們在拿到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的時候，首先要查各國藥典美國、英國、歐洲、日本、中國藥典，看這個品種的收載情況，進(jìn)行方法的比較，限度的比較，并不是說你提供的標(biāo)準(zhǔn)就要照著做一遍就OK了，比如說有關(guān)物質(zhì)，我們可能要做一個檢測限，含量對三批結(jié)果進(jìn)行一個比對，我們做出的三批與報告單進(jìn)行一個比較。針對具體企業(yè)間轉(zhuǎn)移的品種可能就更復(fù)雜一些。

       方法的確認(rèn)

       在日常的檢驗工作中，經(jīng)常方法確認(rèn)和方法轉(zhuǎn)移以及方法驗證這3個概念相混淆，尤其是方法確認(rèn)，大家的理解各不相同，做法各異。方法確認(rèn)的核心有三點，首先確認(rèn)的是藥典的分析方法或法定的分析方法進(jìn)行確認(rèn)，你建立一個新方法一定是法定的方法。第二證明藥典分析方法或法定的分析方法適用于被測樣品，被測樣品質(zhì)量可控，方法可行。第三證明方法的使用人員有能力成功的操作藥典分析方法或法定的分析方法。比如說研發(fā)人員在對藥典的方法對研發(fā)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗的時候，不可能再進(jìn)行好多的驗證，我們是通過系統(tǒng)適應(yīng)性試驗證明操作人員能夠成功的來操作藥典的分析方法。

       關(guān)于方法的確認(rèn)，WHO、 ISO17025、 FDA 、USP發(fā)布的指導(dǎo)原則，國際上權(quán)威的機構(gòu)的共同意見是，只要是方法確認(rèn)。一定是藥典的分析方法或法定的分析方法，對于第二點和第三點來說，WHO、 FDA 、USP的側(cè)重點就有所不同。

       WHO 在藥品質(zhì)量控制實驗室操作規(guī)范是明確指出，方法確認(rèn)是證明一個藥典的分析方法或經(jīng)過驗證的法定分析方法適用于本次檢驗的過程。WHO的定義側(cè)重于強調(diào)第二點，證明藥典分析方法對產(chǎn)品的適用性。

       ISO17025 、FDA 、以及USP對分析方法確認(rèn)的定義基本上可以總結(jié)為，檢驗室驗室和方法使用者應(yīng)該證明其對藥典方法有充分的了解并且有能力重現(xiàn)藥典方法，可見ISO17025 、FDA 、以及USP對方法確認(rèn)側(cè)重于第三點，強調(diào)檢測實驗室人員和檢驗人員操作藥典方法的能力。

       如果將WHO和FDA以及USP的定義結(jié)合起來，就是說一個相對完整的方法確認(rèn)是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測樣品，被測樣品質(zhì)量可控，方法可行，同時還證明方法使用人員有能力成功操作藥典分析方法和法定分析方法。

       藥品分析實驗室在采用藥典分析方法或法定分析方法進(jìn)行檢驗時，不需要對分析方法進(jìn)行驗證，但需要對分析方法進(jìn)行確認(rèn)，以證明承擔(dān)檢驗的實驗室能夠正確操作藥典方法。具體確認(rèn)那些內(nèi)容，則沒有明確的規(guī)定，應(yīng)根據(jù)方法本身的特點和檢驗人員對方法操作的熟練程度由檢驗室自己確定。