時間

里程碑事件

2005年3月24日

國務(wù)院針對**流通和接種監(jiān)管環(huán)節(jié)制定了《**流通和預(yù)防接種管理條例》。

2006年4月4日

家疾病預(yù)防控制局針對**在儲存、運輸監(jiān)管環(huán)節(jié)制定《**儲存和運輸管理規(guī)范》。

2019年6月29日

廣受社會各界關(guān)注的《**管理法》表決通過，將從2019年12月1日起實施，引起社會的廣泛關(guān)注，《**管理法》是將分散在多部法律法規(guī)中的監(jiān)管規(guī)定進行了全鏈條統(tǒng)籌整合，涵蓋**研制、生產(chǎn)、流通、預(yù)防接種各個環(huán)節(jié)，將**監(jiān)管提升到法律層級，行業(yè)人士稱這是史上最嚴的**管理法。

2019年9月2日

國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心官網(wǎng)發(fā)布《**上市后生產(chǎn)工藝變更技術(shù)指導(dǎo)原則》公示稿，彌補了我國對**上市后生產(chǎn)工藝變更技術(shù)在法規(guī)層面和技術(shù)層面的空白。

2019年11月12日

國家**檢查中心官網(wǎng)發(fā)布《**生產(chǎn)現(xiàn)場檢查指南》（征求意見稿），這是國內(nèi)首部針對**生產(chǎn)現(xiàn)場檢查指南。

序號

法規(guī)依據(jù)

1

《中華人民共和國藥品管理法》

2

《中華人民共和國**管理法》

3

《中華人民共和國藥品管理法實施條例》

4

《中華人民共和國藥典》

5

《藥品注冊管理辦法》

6

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄

7

《藥品注冊核查管理規(guī)定》

8

《**儲存和運輸管理規(guī)范》

9

《生物制品批簽發(fā)管理辦法》

10

《藥品不良反應(yīng)報告和監(jiān)測管理辦法》

11

《**流通和預(yù)防接種管理條例》

12

《藥品召回管理辦法》

13

《藥品說明書和標簽管理規(guī)定》

14

《藥品生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)場檢查風(fēng)險評定原則》

15

《醫(yī)療廢物管理條例》

16

《病原微生物實驗室生物安全管理條例》

17

《食品藥品監(jiān)管總局國家衛(wèi)生計生委關(guān)于進一步加強**流通監(jiān)管促進**供應(yīng)工作的通知》（食藥監(jiān)藥化監(jiān)〔2017〕76號）

18

藥監(jiān)管理部門批準的各**企業(yè)制造及檢定規(guī)程

關(guān)鍵點

檢查要點

 細胞基質(zhì)

細胞基質(zhì)系指可用于**生產(chǎn)的所有動物或人源的連續(xù)傳代細胞系、二倍體細胞株、原代細胞及重組工程細胞等。企業(yè)應(yīng)當(dāng)按照《中國藥典》和藥品GMP要求建立符合生產(chǎn)要求的細胞庫。生產(chǎn)和檢定用細胞應(yīng)符合現(xiàn)行《中國藥典》三部生物制品通則中“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”的相關(guān)要求。

1) 生產(chǎn)和檢定用細胞歷史來源清晰、有證明資料。

2) 生產(chǎn)用原代細胞制備和檢定應(yīng)符合《中國藥典》的要求；制備注射用減毒活**的原代細胞和動物組織應(yīng)來源于無特定病原體（SPF）級動物（包括雞胚）；制備口服**和滅活**的原代細胞應(yīng)來自清潔級或清潔級以上動物。

3) 傳代細胞應(yīng)按照《中國藥典》要求建立細胞庫并符合規(guī)定。工作細胞庫的生物學(xué)特性、遺傳學(xué)特性應(yīng)與主細胞庫一致，傳代次數(shù)與已批準的要求一致，不應(yīng)超過規(guī)定的代次。

4) 主細胞庫、工作細胞庫及生產(chǎn)終末代細胞應(yīng)按照《中國藥典》的要求進行檢定。

5) 儲藏容器應(yīng)當(dāng)在適當(dāng)?shù)臏囟认卤４妫⒂忻鞔_的標簽，標簽應(yīng)至少標記細胞的編號、名稱、代次、批號、制備日期等內(nèi)容。

6) 細胞庫應(yīng)在規(guī)定的條件下專用設(shè)備保存，專人負責(zé)；出入庫應(yīng)有規(guī)定和記錄。

7) 細胞庫存儲區(qū)域應(yīng)當(dāng)建立人員授權(quán)、進出登記制度，避免非授權(quán)人員接觸細胞。

8) 儲存期間，應(yīng)當(dāng)能夠?qū)Υ鏃l件（例如，液氮液位等）進行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)控，及時發(fā)現(xiàn)儲存條件變化，確保細胞的保存條件。

9) 細胞庫，尤其是主細胞庫應(yīng)備份，并在不同地點保存，應(yīng)考慮停電、火災(zāi)等應(yīng)急情況的影響。

10) 應(yīng)對工作細胞庫復(fù)蘇能力等進行考察，了解細胞儲存期間的質(zhì)量變化，考察可在**生產(chǎn)過程中同步進行。

菌毒種

菌毒種是指直接用于**制造和檢定的細菌、病毒、DNA重組工程菌等。**生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)按照《中國藥典》和藥品注冊要求建立種子批系統(tǒng)。生產(chǎn)用菌毒種需用動物傳代時，應(yīng)使用SPF級動物。

1) 生產(chǎn)和檢定用菌毒種歷史來源清晰、有證明資料。

2) 應(yīng)在符合GMP條件下建立主種子批和工作種子批；工作種子批的生物學(xué)特性和遺傳學(xué)特性應(yīng)與主種子一致。

3) 應(yīng)建立生產(chǎn)用菌毒種主種子批全基因序列的背景資料，減毒活**主種子批應(yīng)進行全基因序列測定，應(yīng)對生產(chǎn)用菌毒種已知的主要抗原表位的遺傳穩(wěn)定性進行檢測，并證明在規(guī)定的使用代次內(nèi)其遺傳性狀是穩(wěn)定的。減毒活**中所含病毒或細菌的遺傳性狀應(yīng)與主種子批一致。

4) 菌毒種標簽上應(yīng)至少標明菌毒種編號、名稱、代次、批號、制備日期等內(nèi)容。

5) 生產(chǎn)用菌毒種的存儲設(shè)備需滿足存儲需要，菌毒種保藏應(yīng)當(dāng)備份，且備份種子批應(yīng)儲存于不同的地點或區(qū)域，在發(fā)生菌毒種儲存設(shè)備故障、自然災(zāi)害等情況下，能夠采取有效應(yīng)對措施。

6) 菌毒種應(yīng)在規(guī)定的條件下專用設(shè)備保存，專人負責(zé)；出入庫應(yīng)有規(guī)定和記錄。

7) 菌毒種存儲區(qū)域應(yīng)當(dāng)建立人員授權(quán)、進出登記制度，避免非授權(quán)人員接觸菌毒種。

8) 菌毒種儲存溫度，應(yīng)符合特定菌毒種的特征要求。儲存期間，應(yīng)當(dāng)對儲存條件進行監(jiān)控，并應(yīng)當(dāng)具備報警功能，確保菌毒種儲存條件符合要求。

9) 應(yīng)對菌毒種工作種子批進行穩(wěn)定性考察，及時了解菌毒種儲存期間的質(zhì)量變化，考察可在**生產(chǎn)過程中同步進行。

10) 菌毒種操作應(yīng)在相應(yīng)的生物安全級別下進行。

11) 生產(chǎn)、科研及檢定用菌毒種應(yīng)分開存放，不得存放于同一設(shè)備。

生產(chǎn)用原輔料

**生產(chǎn)用原輔料管理應(yīng)符合《中國藥典》三部“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”的規(guī)定，對原輔料進行分級管理。原輔料檢查要點：

1) 供應(yīng)商應(yīng)當(dāng)經(jīng)過評估與審計，供應(yīng)商發(fā)生相關(guān)質(zhì)量事件時，應(yīng)通過有效方式告知采購方。

2) 生產(chǎn)用主要原材料、輔料的質(zhì)量標準、取樣量及過程。

3) 關(guān)注生產(chǎn)用原輔料的入廠驗收、儲存條件、出入庫記錄、留樣等。

4) 動物源性原輔料應(yīng)有非疫區(qū)來源證明。

5) 產(chǎn)品配制用穩(wěn)定劑（例如，糖類、氨基酸、碳酸氫鈉、明膠等）、佐劑及稀釋劑（如氫氧化鋁、氯化鈉等）應(yīng)符合相關(guān)質(zhì)量標準和內(nèi)控標準（如微生物限度、細菌內(nèi)毒素等）。

6) 配制培養(yǎng)基、培養(yǎng)液、生產(chǎn)過程中使用的原材料（例如，氨基酸、維生素、牛血清、抗生素、蛋白質(zhì)、無機鹽、碳水化合物等）和各種溶液應(yīng)符合相應(yīng)質(zhì)量標準；培養(yǎng)液及生產(chǎn)用溶液儲存條件與時間應(yīng)經(jīng)過驗證。

7) 生物制品工藝過程中使用的動物源性原輔料應(yīng)證明無外源性或內(nèi)源性病毒污染，分析方法應(yīng)經(jīng)過驗證，其質(zhì)量標準和檢定方法應(yīng)符合現(xiàn)行版藥典或相關(guān)的法規(guī)。

關(guān)鍵點

檢查要點

產(chǎn)品質(zhì)量回顧

1）品種工藝介紹（生產(chǎn)工藝流程圖，關(guān)鍵質(zhì)量屬性，關(guān)鍵工藝參數(shù)；如有變更，變更應(yīng)符合相關(guān)注冊要求，變更前后的工藝比較、接受標準及工藝評估）。

2）菌毒種、細胞基質(zhì)的管理及使用情況（菌毒種、細胞的關(guān)鍵屬性的監(jiān)測）。

3） 生產(chǎn)過程控制（關(guān)鍵工藝參數(shù)、中間產(chǎn)品、物料平衡、收率等）。

4）產(chǎn)品詳細的生產(chǎn)及檢驗情況（批號、菌毒種、批間一致性、產(chǎn)品產(chǎn)量的溯源情況列表）、批量、檢驗及批簽發(fā)情況。

5）成品的儲存和發(fā)運（存儲溫度和運輸溫度評價）。

6）產(chǎn)品的流向信息（成品的流向情況，包括原液批號、成品批號、數(shù)量、去向）。

7）關(guān)鍵質(zhì)量屬性分析（原液、半成品、成品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的趨勢分析；穩(wěn)定性考察趨勢分析）。

8）應(yīng)對匯總的數(shù)據(jù)進行分析，對產(chǎn)品的生產(chǎn)情況和質(zhì)量管理進行總結(jié)，提出建議。

生產(chǎn)區(qū)污染控制

1) 應(yīng)盡可能使用封閉系統(tǒng)提高無菌保障和隔離水平。在工藝中使用開放系統(tǒng)時，應(yīng)采取有效的控制措施，防止污染、交叉污染、混淆和差錯。

2) 應(yīng)避免與產(chǎn)品直接接觸物品清洗/滅菌后的二次污染。

3) 取樣、加料、中間品轉(zhuǎn)運時，應(yīng)確保各類連接的無菌保障程度。

4) 關(guān)注生產(chǎn)用微生物活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)的分區(qū)控制?；罹疃緟^(qū)工器具傳出至非活菌活毒區(qū)之前，應(yīng)充分滅活；滅活前、后工器具應(yīng)分區(qū)放置，避免交叉污染；活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)人流、物流通道應(yīng)分開設(shè)置；活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)、滅活前與滅活后區(qū)域的凈化空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)分別設(shè)置，活菌活毒區(qū)應(yīng)相對負壓。

5）中間產(chǎn)品、半成品的儲存容器變更，例如變?yōu)橐淮涡韵到y(tǒng)，應(yīng)做變更控制、相容性試驗及穩(wěn)定性試驗等研究工作，加強實物驗收和供應(yīng)商審計。

QC實驗室管理

除對實驗室常規(guī)檢查外，還應(yīng)重點關(guān)注**產(chǎn)品鑒別、效力試驗、特異性**試驗、病毒滴度、抗原含量檢測、宿主蛋白殘留、DNA殘留等。

1) 測定方法應(yīng)進行驗證或確認。

2) 新建立或改良的方法應(yīng)進行方法學(xué)驗證，還應(yīng)與傳統(tǒng)方法進行比較，并關(guān)注變更后方法的注冊合規(guī)性。

3) 標準品/參考品應(yīng)可溯源。如自制工作標準品/參考品，應(yīng)建立質(zhì)量標準，每批用法定標準品/參考品進行標化并確定有效期。

4）應(yīng)使用符合相關(guān)要求或級別的實驗動物，除另有規(guī)定外，均應(yīng)使用清潔級或清潔級以上的動物；小鼠應(yīng)來自封閉群動物或近交系動物。

5）動物實驗人員應(yīng)為專職人員，并應(yīng)當(dāng)經(jīng)過培訓(xùn)。

6）實驗動物應(yīng)來源清晰。

共線生產(chǎn)管理

共線生產(chǎn)管理應(yīng)符合《中國藥典》、《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄中的相關(guān)規(guī)定。

在原液生產(chǎn)過程中有某些特定活生物體的階段，應(yīng)當(dāng)根據(jù)產(chǎn)品特性和設(shè)備情況，采取相應(yīng)的預(yù)防交叉污染措施。

在產(chǎn)品分裝階段，使用同一分裝間、分裝設(shè)備分裝、凍干不同產(chǎn)品的，應(yīng)當(dāng)關(guān)注其防止交叉污染的措施。

1） 卡介苗與結(jié)核菌素應(yīng)在獨立廠房內(nèi)生產(chǎn)，嚴格分開。

2） 炭疽桿菌、肉毒梭狀芽孢桿菌和破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌應(yīng)在專用的設(shè)施內(nèi)生產(chǎn)。

3） 減毒活**與滅活**、不同給藥途徑的**不能在同一分裝間、同一分裝凍干設(shè)施進行分裝和凍干。

4） 對于共線生產(chǎn)的風(fēng)險評估報告，應(yīng)包括人流和物流、微生物控制、活性物質(zhì)的理化特性、工藝特點、清潔工藝、環(huán)境監(jiān)測、控制策略、殘留成分限度檢測能力評估等。

5） 關(guān)注防止交叉污染的措施（例如采用階段式生產(chǎn)、封閉系統(tǒng)、直接接觸產(chǎn)品的生產(chǎn)工具按品種專用、一次性使用系統(tǒng)等）。

6） 共用設(shè)施設(shè)備的清潔驗證。

7） 共線產(chǎn)品交叉污染控制效果評價（如年度報告）。

儲存和運輸

**的儲存和運輸應(yīng)符合《**流通和預(yù)防接種管理條例》及其相關(guān)規(guī)定。

1） 冷庫、冷藏車及冷藏箱應(yīng)根據(jù)國家要求及GSP標準進行驗證，包括熱分布，斷電、開門、外界環(huán)境等惡劣條件挑戰(zhàn)試驗。

2） **應(yīng)實施效期預(yù)警管理，**應(yīng)按照規(guī)定的發(fā)貨順序進行發(fā)貨，無法在有效期內(nèi)配送至接種單位的**不得進入流通環(huán)節(jié)。

3） 如采用配送企業(yè)運送產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)符合上述有關(guān)規(guī)定，至少包括資質(zhì)審核、配送能力評估、簽訂儲存配送合同和質(zhì)量協(xié)議、配送企業(yè)資料備案等。

4） 發(fā)運記錄應(yīng)完整，至少包括產(chǎn)品名稱、規(guī)格、批號、數(shù)量、收貨單位和地址、聯(lián)系方式、發(fā)貨日期、運輸方式等。

5） 追溯體系應(yīng)完整，應(yīng)保證**最小包裝單位生產(chǎn)和銷售環(huán)節(jié)的可追溯性。

關(guān)鍵點

檢查要點

種子復(fù)蘇

工作代種子接種在適宜的培養(yǎng)基上，經(jīng)傳代擴增至規(guī)定代次和規(guī)模，獲得生產(chǎn)用種子。

1) 菌種或細胞種子遺傳穩(wěn)定性確認。

2) 培養(yǎng)物做純菌檢查，確保種子培養(yǎng)液無污染。

3) 生產(chǎn)用種子代次應(yīng)為批準的固定代次。

4) 生長狀態(tài)觀察及生物學(xué)特征確認。

5) 應(yīng)使用經(jīng)批準的培養(yǎng)基配方。

發(fā)酵培養(yǎng)和收獲

生產(chǎn)用種子按比例接種至大罐培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)，根據(jù)細菌或細胞的生長特性在發(fā)酵過程中適當(dāng)補充所需的營養(yǎng)物，控制培養(yǎng)溫度、攪拌速度、通氣量、通氣方式、罐壓等，同時監(jiān)控溶氧、pH值、生長濃度等。培養(yǎng)過程或培養(yǎng)結(jié)束取樣進行純菌檢查。

1) 細胞培養(yǎng)時對照細胞外源因子檢測應(yīng)符合規(guī)定。

2) 關(guān)注培養(yǎng)曲線及收獲期狀態(tài)（培養(yǎng)時間、培養(yǎng)濃度）；發(fā)酵培養(yǎng)的工藝驗證數(shù)據(jù)。

3) 收獲培養(yǎng)物純度、質(zhì)粒保有率（外源基因拷貝數(shù)）檢查。

4) 細胞培養(yǎng)所使用的生物源性物料（如牛血清、胰蛋白酶）的質(zhì)量控制及使用濃度。

5) 應(yīng)使用經(jīng)批準的培養(yǎng)基配方。

6) 大罐培養(yǎng)過程中溶氧、pH值、溫度、攪拌速度和通氣量等參數(shù)的監(jiān)測與記錄。

純化

將收獲的菌體或細胞經(jīng)適宜方法破碎，以過濾、離心超濾等方法去除菌體/細胞（或碎片），超濾后的料液進行鹽析或凝膠吸附進行粗純；使用密度梯度離心法、層析法等進行精純。

1) 關(guān)注破碎、離心、深層過濾、超濾、鹽析等工序的各項質(zhì)量控制參數(shù)。

2) 柱層析工藝應(yīng)對層析系統(tǒng)設(shè)備進行驗證，包括系統(tǒng)設(shè)備關(guān)鍵傳感器的校驗（通常為紫外、電導(dǎo)、流速、pH等）、關(guān)鍵配件的更換標準或周期、系統(tǒng)清潔或消毒驗證等。

3) 密度梯度離心純化方法和柱層析純化方法的介質(zhì)使用次數(shù)和層析柱清潔方法等應(yīng)進行驗證。

4) 應(yīng)驗證純化過程中所使用的表面活性劑和沉淀劑已有效去除。

5) 純化后如需進行甲醛處理，應(yīng)控制蛋白濃度、溫度、加入的甲醛濃度和作用時間。

6) 中間品的儲存方式、條件和儲存時限應(yīng)經(jīng)過驗證。

原液制備

純化產(chǎn)物稀釋和除菌過濾后即為原液。

1) 應(yīng)評估除菌過濾前藥液微生物負載狀況，除菌濾芯在使用前后應(yīng)進行完整性檢測。

2) 關(guān)注抗原收獲率，包括收獲率控制范圍。

3) 原液應(yīng)進行無菌檢查、蛋白質(zhì)濃度、特異蛋白帶、純度、細菌內(nèi)毒素、末端氨基酸序列等檢查；重組細胞株生產(chǎn)的原液還應(yīng)關(guān)注牛血清白蛋白殘留量、細胞DNA殘留量、細胞蛋白殘留量測定。

關(guān)鍵點

檢查要點

菌種培養(yǎng)

菌種培養(yǎng)是指工作種子批菌種經(jīng)過復(fù)蘇、傳代擴增至規(guī)定代次和規(guī)模，獲得生產(chǎn)用種子用于大罐（發(fā)酵）培養(yǎng)。"

1) 菌種傳代期間，應(yīng)進行純菌檢查或染色鏡檢以確保用于擴大培養(yǎng)的種子無污染。

2) 培養(yǎng)條件應(yīng)控制溫度、時間、二氧化碳濃度等參數(shù)，液體培養(yǎng)的應(yīng)考慮攪拌及通氣。

3) 可采取鏡檢、OD值測定、pH值測定、絮狀單位測定等方法對細菌的生長狀態(tài)進行觀察。

4) 應(yīng)使用經(jīng)批準的培養(yǎng)基配方。

發(fā)酵培養(yǎng)

生產(chǎn)用種子按規(guī)定的比例接種至大罐培養(yǎng)基，采用合適的培養(yǎng)條件，在培養(yǎng)過程中應(yīng)取樣進行純菌檢查或染色鏡檢，以保證沒有雜菌污染。"

1) 生產(chǎn)用種子應(yīng)為批準的固定代次。

2) 應(yīng)使用經(jīng)批準的培養(yǎng)基配方。

3) 大罐培養(yǎng)過程中溶氧、pH值、溫度、攪拌速度和通氣量等參數(shù)的監(jiān)測與記錄。

4) 培養(yǎng)過程中細菌濃度、抗原滴度、血凝滴度、絮狀單位的檢測和確認。關(guān)注細菌的生長曲線及收獲期狀態(tài)。

5) 培養(yǎng)物殺菌溫度、時間、攪拌速度、殺菌劑濃度的控制和確認。

6) 對發(fā)酵罐（系統(tǒng)）各項功能（參數(shù)控制、數(shù)據(jù)采集等）進行驗證和確認。

7) 發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵罐的清洗、消毒的驗證及確認。

殺菌與多糖收獲

細菌性多糖**是指采用各種生物技術(shù)提取細菌的莢膜多糖抗原，經(jīng)純化后加入適宜的穩(wěn)定劑制造而成的**。

大罐培養(yǎng)結(jié)束后進行殺菌，一般采用甲醛殺菌，如傷寒沙門氏菌、腦膜炎球菌以及b型流感嗜血桿菌；也可采用脫氧膽酸鈉溶液或冷酚溶液進行殺菌，如肺炎球菌。殺菌后，采用離心法或其他合適方法去除菌體，收集上清液提取多糖。

1) 培養(yǎng)終點（時間、細菌濃度、pH值等）的確定，并進行純菌檢查。

2) 殺菌方法驗證、殺菌劑加入量及相關(guān)參數(shù)如溫度、時間、攪拌速度的控制與確認。

3) 關(guān)注人員操作規(guī)范和活菌操作區(qū)生物安全防護措施。

多糖純化

多糖純化包括多糖粗制和多糖精制過程。

1) 關(guān)注多糖粗制、精制過程的控制參數(shù)。

2) 粗制多糖、精制多糖的存放條件和效期，應(yīng)有驗證數(shù)據(jù)支持。

3) 關(guān)注共用生產(chǎn)設(shè)備的清潔和避免交叉污染的措施。

4) 純化過程中通常會使用多種有機溶劑，關(guān)注有機溶劑的使用及去除驗證和監(jiān)測。

原液制備

多糖**的原液是指將干燥后冷凍保存的精制多糖，用滅菌注射用水或滅菌磷酸鹽緩沖液溶解，再經(jīng)除菌過濾之后獲得的**中間品，稱作多糖原液，對于多價**則稱為混合前單價多糖原液。

1) 關(guān)注原液批號，尤其對于多價**的各型抗原，應(yīng)有防止批號混淆、出錯的預(yù)防措施。

2) 原液保存溫度、保存條件（避光、防潮）和效期，應(yīng)進行驗證。

關(guān)鍵點

檢查要點

殺菌及毒素收獲

大罐培養(yǎng)結(jié)束、純菌檢查合格后，向培養(yǎng)液中加入適宜濃度的殺菌劑殺菌，按批準的工藝進行純化或脫毒。

1) 應(yīng)對毒素效價（絮狀單位）、血凝滴度、細菌濃度等進行監(jiān)測，并確定培養(yǎng)終點。

2) 關(guān)注人員活菌操作區(qū)生物安全防護措施。

3) 殺菌方法應(yīng)經(jīng)過驗證（殺菌方法具體參數(shù)：殺菌劑、濃度、時間）。

4) 毒素效價、血凝滴度檢測方法應(yīng)經(jīng)過實驗室適用性確認。

毒素精制純化

應(yīng)用經(jīng)批準的方法對收獲液純化得到精制毒素。一般多采用硫酸銨鹽析、蔗糖密度梯度離心、透析或超濾等方法。

1) 毒素純化方法驗證。

2) 硫酸銨添加方式、濃度、鹽析時間的控制和確認。透析或超濾后殘留硫酸銨的測定。

3) 過濾方式、設(shè)備、材質(zhì)、孔徑的選擇和確認，過濾操作參數(shù)的控制和確認。

4) 離心溫度、轉(zhuǎn)速和時間的控制和確認，蔗糖密度梯度離心需對蔗糖濃度的確認。

5) 中間品的儲存方式、條件和儲存時限應(yīng)經(jīng)過驗證。

脫毒及類毒素制備

精制抗原/毒素需對**組份進行脫毒，脫毒劑包括甲醛、戊二醛等。脫毒并去除脫毒劑后即為精制類毒素。

1) 脫毒時抗原/毒素濃度的控制和確認。

2) 脫毒劑的添加順序、濃度及加入比例的控制和確認。

3) 脫毒溫度、時間控制和確認。

4) 脫毒試驗結(jié)果的確認。

5) 去除脫毒劑的方法應(yīng)經(jīng)過驗證。

6) 中間品的儲存方式、條件和儲存時限應(yīng)經(jīng)過驗證。

類毒素原液制備

將精制類毒素中根據(jù)工藝要求加入適宜防腐劑，經(jīng)過除菌過濾，即為精制類毒素原液。

1) 原液保存條件和效期應(yīng)經(jīng)過驗證。

2) 關(guān)注原液質(zhì)量標準和檢測結(jié)果，尤其是**逆轉(zhuǎn)試驗、效價試驗、絮狀單位、純度、無菌檢查、特異性**檢查。

關(guān)鍵點

檢查要點

多糖抗原制備

多糖抗原的制備及其工藝檢查要點，參考“細菌性多糖**”章節(jié)。

載體蛋白制備

用于結(jié)合**的載體蛋白，目前已知的有破傷風(fēng)類毒素TT、白喉類毒素DT、無毒的白喉突變株毒素CRM197、B群腦膜炎球菌外膜蛋白復(fù)合物OMP等。

類毒素載體蛋白的生產(chǎn)工藝（破傷風(fēng)類毒素和白喉類毒素）基本相同，采用柱色譜法或其他經(jīng)批準的方法對精制類毒素原液進一步純化，并配制至適宜濃度即成載體蛋白。重組表達的載體蛋白檢查要點可參考重組類**。

1）載體蛋白各項質(zhì)量指標應(yīng)符合《中國藥典》與產(chǎn)品注冊標準的要求，尤其應(yīng)注意載體蛋白的純度。

2）純化過程關(guān)鍵工藝參數(shù)的控制，柱層析工藝應(yīng)對層析介質(zhì)、緩沖液離子強度（鹽濃度）和pH值、流速及壓力、平衡體積、上樣量、收樣范圍等進行控制。

3）明確規(guī)定層析柱的合格標準及使用壽命，層析柱的清潔或消毒、保存和再生的驗證。

4）柱層析工藝應(yīng)對層析系統(tǒng)設(shè)備進行驗證，包括系統(tǒng)設(shè)備關(guān)鍵傳感器的校驗（通常為紫外、電導(dǎo)、流速、pH等）、關(guān)鍵配件的更換標準或周期、系統(tǒng)清潔或消毒驗證等。

結(jié)合物制備

多糖抗原與載體蛋白之間的結(jié)合是利用多糖和蛋白分子中存在的羧基、半縮醛、氨基/亞氨基、巰基/二硫鍵、羥基等功能鍵，通過共價結(jié)合完成的。目前常見的方法是溴化氰（CNBr）活化法和還原氨基化法等方法。多糖抗原與載體蛋白的結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，將結(jié)合反應(yīng)混合物用適宜的液體透析或超濾透析，即獲得多糖蛋白結(jié)合物。

1) 應(yīng)建立測定多糖活化或/和蛋白活化程度的方法、關(guān)鍵參數(shù)的控制。

2) 采用透析或超濾工藝去除多糖衍生物、蛋白衍生物中殘留的化學(xué)試劑應(yīng)進行驗證。

3) 關(guān)注劇毒化學(xué)試劑管理。

4) 衍生物、結(jié)合物保存條件和時間應(yīng)進行驗證。

結(jié)合物純化與原液制備

多糖結(jié)合物經(jīng)柱層析等方法純化得到結(jié)合物原液。

1) 層析柱純化方法、介質(zhì)使用次數(shù)（即壽命）、層析柱清潔方法等應(yīng)進行驗證。

2) 原液的儲存方式、條件和儲存時限應(yīng)經(jīng)過驗證。

3) 關(guān)注原液檢測結(jié)果，尤其是多糖含量、多糖與蛋白質(zhì)比值、高分子結(jié)合物含量或游離多糖含量、細菌內(nèi)毒素含量、化學(xué)試劑殘留量等。

關(guān)鍵點

檢查要點

半成品

1) 半成品各組分（如原液、佐劑、穩(wěn)定劑、稀釋液、防腐劑等）實際加入量應(yīng)與計算量一致。

2) 佐劑配制及儲存應(yīng)經(jīng)過驗證，并有質(zhì)量標準及穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。

3) 吸附過程應(yīng)進行控制，并明確控制指標。

4) 各組分的加入順序應(yīng)符合工藝要求，并按經(jīng)過驗證的參數(shù)（如轉(zhuǎn)速、攪拌時間等）混合，確保半成品均一性。

5) 半成品需要存放的，應(yīng)保存在合適的容器中并按經(jīng)過驗證的條件（如溫度、時間）下儲存。

6) 半成品轉(zhuǎn)運應(yīng)采取有效措施（如溫度、時間、密封性等）控制質(zhì)量（包括無菌、有效物質(zhì)含量等）。

7) 對于混懸狀或含有佐劑的**產(chǎn)品，還應(yīng)當(dāng)關(guān)注分裝過程中的產(chǎn)品的均一性。

8) 對溫度較為敏感的**制品，關(guān)注分裝過程中的對產(chǎn)品溫度的控制措施。

9) 半成品配制、分裝及軋蓋應(yīng)在規(guī)定的時限內(nèi)完成。

10) 關(guān)注分裝后剩余半成品及活菌活毒區(qū)污物的滅活處理措施。

11) 應(yīng)按要求對制品進行燈檢，使用自動燈檢機進行燈檢前，應(yīng)進行燈檢功能測試。

12）關(guān)注產(chǎn)品生產(chǎn)過程中脫冷鏈時間與穩(wěn)定性支持數(shù)據(jù)。